当今影响生物制药发展的重要技术之一是分离纯化技术。来自北京赛升药业股份有限公司的孔双泉在CISILE 2014“药物纯化、检测技术专题论坛”上分析了现有生物制药行业所用的分离纯化技术特点以及新兴纯化技术的发展。
从机理上划分，生物制药行业现行的分离纯化技术主要有五大类：基于溶解度差异的分离纯化技术、基于分子大小差异的分离纯化技术、基于选择性吸附差异的分离纯化技术、基于电荷不同的分离技术 、基于对配体亲和力差异的分离技术。
以基于溶解度差异的分离纯化技术为例，其主要包括盐溶盐析法、有机溶剂沉淀法、等电点法、双水相萃取法和反胶团萃取法，每种方法均有其明显的特点或适合分离的对象。
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方法
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特点
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盐溶盐析法
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优点是温度系数小而溶解度大
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有机溶剂沉淀法
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多用于生物小分子、多糖及核酸产品的分离纯化；低温一般先冷却—20度；常与其他沉淀方法联用。
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等电点法
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适用于低温操作．因对于许多生物分子等电点比较接近，故此法常与其他方法结合使用，较难扩大生产。
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双水相萃取法
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与传统的分离技术相比，具有操作条件温和、处理量大、易连续操作等优点。
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反胶团萃取法
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具有选择性高、萃取过程简单，正萃、反萃同时进行，能有效防止大分子失活、变性。其不足之处包括：普通离子型表面活性剂可能对产品产生污染；常用的离子型表面活性剂容易造成蛋白质的变性和失活。
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从报告中获悉，现行的膜分离技术常用的膜有四种：用于细菌和病毒分离的微滤膜;用于蛋白质和多肽分离的超滤膜;用于抗生素、合成药物、核苷酸、无机盐分离的纳滤膜;用于无机盐分析的反渗透膜。
从纯化策略上看，生物制药的分离纯化主要分四个阶段：样品准备(破碎、过滤和离心)、粗提(分离、浓缩和稳定样品)、中度纯化(去除大部分杂质)和精细纯化(高纯度)。当前较为成熟的生物分离纯化技术如IEX、HIC等具有不同的特色。
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层析技术
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主要特色
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粗提
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中度纯化
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精细纯化
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IEX
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高分辨率、高载量、快速
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★★★
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★★★
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★★★
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HIC
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分辨率好、载量一般、快速
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★★
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★★★
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★
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AC
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高分辨率、高载量、快速
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★★★
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★★★
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★★
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GF
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高分辨率
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★
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★★★
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RPC
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高分辨率
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★
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★★★
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分离纯化工业化影响因素主要来自设备和分离介质，目前生物制药企业纯化工业所使用的设备主要有GE AKTA Pure 蛋白质层析纯化系统、 高分辨率的分析制备平台——BioLogic DuoFlow中高压层析系统以及北京创新通恒第三代工业化生产HPLC系统;分离介质主要有BIO—RAD公司适合工业化的耐受高压层析介质-UNOsphere SUPrA 亲和介质和UNOsphere Q 阴离子交换介质、利用灌注层析技术制备层析介质-POROS胶体是灌注层析技术的填料以及PALL公司HEA和PPA HyperCelTM混合模式填料。
基于生物制药纯化对高通量、高分辨率等的追求，分离纯化技术也得到了快速发展，主要有三种：第一，扩张床吸附技术，该技术结合了澄清、浓缩及产品捕捉三个步骤，在基因工程产品的分离纯化过程中得到较好的发展;第二，径向膜层析技术，该技术由于流向的截面积大，具备了纯化速度快处理量大以及简单通过改变柱长便可增加上样量的特点，利于放大生产;第三，置换层析技术，与传统的洗脱层析技术相比，其明显的优势在于高上样量、高产率、高分辨率、易于操作等。
目前生物纯化技术的设备主要是以GE公司的AKTA系统，据了解，该产品在生物制药企业的全球市场占有率在90%左右，中国生物制药市场的占有量几近100%。相关消息显示，国内有研究机构和仪器制造企业已经着手生物纯化设备产品的研发，并已进入研发后期。在生物制药快速发展的今天，生物纯化设备也将得到快速的发展。(撰稿：杨改霞)
